Características del Agar Rainbow para detección de Ecoli 0157 sobre x 30g
Esta bacteria suele ser endémica del ganado y se propaga a través de la carne contaminada1, y el Servicio de Inspección de Seguridad Alimentaria (USDA-FSIS) la ha declarado un “adulterante oficial” y exige a los productores de carne que la excluyan de sus productos2.
Rainbow Agar O157 tiene propiedades selectivas y cromogénicas que lo hacen particularmente útil para aislar cepas patógenas de E. coli. El medio contiene sustratos cromogénicos que son específicos de dos enzimas asociadas a E. coli: β-galactosidasa (un sustrato cromogénico azul-negro) y β-glucuronidasa (un sustrato cromogénico rojo).
- La cepa O157:H7 suele ser negativa para la glucuronidasa, por lo que forma colonias negras o grises únicas y distintivas.
- Muchas otras cepas toxigénicas distintas del O157 producen en exceso β-galactosidasa en relación con la β-glucuronidasa en este medio y, en consecuencia, suelen ser de color púrpura, violeta o azul.
- La mayoría de las cepas de E. coli no patógenas son positivas para la glucuronidasa y varían del rosa al magenta, con cepas ocasionales de color púrpura o azul.
- Casi todas las demás especies bacterianas quedan inhibidas en este medio o crecen en colonias blancas o de color crema.
Contenido
Este paquete sellado contiene polvo seco para preparar Rainbow Agar O157. Con 30 gramos de polvo se obtendrán 500 ml o aproximadamente 25 platos.
Preparación
Para preparar 500 ml de Rainbow Agar O157, mezcle 1 paquete de 30 gramos de polvo en 500 ml de agua purificada, hierva suavemente para disolver los componentes y esterilice en autoclave durante 10 minutos a 15 lbs. presión y 121ºC. NO exceda los 10 minutos a este calor y presión. Para volúmenes inferiores a 500 ml, esterilizar en autoclave durante 5 minutos. Enfriar el agar a 45-50 ºC antes de verter o añadir agentes selectivos. Si lo desea, agregue la cantidad adecuada de una solución madre de agente selectivo esterilizada por filtración y mezcle bien. Dispense aproximadamente 20 ml de medio en cada placa de Petri. El medio estará listo para usar tan pronto como se haya enfriado, gelificado y la superficie se haya secado. El medio final debe ser transparente y prácticamente incoloro. No es necesario ajustar el pH. El pH final debe ser de 7,9 a 8,3.
Almacenamiento
El medio en polvo Rainbow Agar O157 es extremadamente higroscópico y debe almacenarse entre 2 ºC y 25 ºC en un ambiente seco en su paquete sin abrir hasta su uso. Las placas Rainbow Agar O157 son estables durante 2 semanas cuando se almacenan en la oscuridad, refrigeradas y envasadas en celofán para inhibir la pérdida de humedad.
Control de calidad del usuario
Se recomiendan los siguientes organismos si se desea o requiere control de calidad. Inocular placas de Rainbow Agar O157 con las siguientes cepas mediante estrías para su aislamiento y luego incubar durante 24 horas a 35 ºC sin niveles elevados de CO₂. El color de las colonias debe leerse en colonias aisladas.
Organismo | Número ATCC | Color en Agar Rainbow 0157 |
Escherichia coli O157:H7 | 43894 | Negro o gris |
Escherichia coli | 11775 | Rosa o magenta |
Enterococcus faecalis | 19433 | Blanco |
Procedimiento: baja flora de fondo
Inocular el medio esparciendo o extendiendo una muestra sospechosa de contener E. coli sobre la superficie del medio. Incubar las placas durante 20 a 24 horas, o más, a 35 ºC sin niveles elevados de CO2 y observar la presencia de colonias coloreadas. La coloración negra o gris distintiva de las colonias de E. coli O157:H7 se observa fácilmente colocando la placa de Petri sobre un fondo blanco. Cuando O157 está rodeada de colonias no toxigénicas de color rosa o magenta, puede tener un tono azulado. Al realizar un subcultivo, las colonias aisladas de E. coli O157:H7 tendrán su coloración negra o gris típica. Debido a la naturaleza selectiva del medio, el tamaño de las colonias formadas es menor que el que se vería en otros medios comúnmente utilizados para cultivar E. coli.
Procedimiento: alta flora de fondo
Para aumentar la selectividad del Agar Arcoiris O157, utilice 0,8 mg/L de telurito de potasio + 10 mg/L de novobiocina. El telurito es altamente selectivo para E. coli O157:H7 y reducirá considerablemente la flora de fondo. La novobiocina inhibe la proliferación de Proteus y el crecimiento de bacterias reductoras de telurito. Se debe tener precaución porque las cepas raras de O157:H7 son sensibles al telurito³. La coloración de las colonias de E. coli O157:H7 será ligeramente más azul con estos agentes selectivos añadidos.
RESULTADOS ESPERADOS (a)
Organismo | Coloración de la colonia(b) |
E. coli O157:H7 | Negro o gris |
E. coli O157:H7 glucuronidase positive | Azul violeta |
E. coli O26:H11 | Blanco |
E. coli O48:H21 | Violeta magenta |
E. coli O111:H- or O111:H8 | Violeta |
Non-toxigenic E. coli | Rosa o magenta (c) |
a. La coloración de las colonias es indicativa de colonias aisladas.
b. El color puede variar según la cepa de E. coli analizada.
c. Puede ser violeta o azul.
Limitaciones
Este medio no debe utilizarse como única base para la identificación de microorganismos. Cualquier colonia sospechosa de ser E. coli O157 u otro serotipo productor de toxina debe analizarse más a fondo para verificar su identidad utilizando un protocolo de confirmación aprobado.
La Klebsiella pneumoniae y las cepas raras de Hafnia alvei o Citrobacter pueden parecerse a la E. coli O157. La Klebsiella forma colonias distintivas de color naranja grisáceo. La Citrobacter forma colonias de color azul grisáceo y las cepas raras de Hafnia pueden formar colonias de color azul grisáceo claro a azul negruzco. Estas especies se pueden diferenciar mediante pruebas de detección de indol o PYR (E. coli: indol positivo, PYR negativo; K. pneumoniae, H. alvei: indol negativo, Citrobacter: PYR positivo).
Referencias
1. Doyle, M.P., y J.L. Schoeni. 1987. Applied Environmental Microbiology 53:2394-2396.
2. Okrend, A.J.G., B.E. Rose y B. Bennett. 1990. Journal of Food Protection 53:249-255.
3. MacRae, M., T. Rebate y I.D. Ogden. 1997. Letters in Applied Microbiology 25:135-137.