¿Cómo utilizar correctamente las placas de Petri en el cultivo de bacterias en laboratorios?

Cuando surge el interrogante sobre la placa de Petri y para qué sirve uno de sus usos más extendido es el de el cultivo de bacterias.

El cultivo de bacterias en placas de Petri es una técnica común en los laboratorios microbiológicos. Entre sus múltiples usos se cuenta el de el diagnóstico de enfermedades infecciosas. A continuación, se presentan los pasos básicos para utilizar correctamente las placas de Petri en el cultivo de bacterias:

1. Preparación del medio de cultivo:

Prepará el medio de cultivo adecuado para las bacterias que deseas cultivar. Esto puede incluir agar nutritivo, agar sangre, agar MacConkey u otros medios especializados según tus necesidades de investigación. Seguí las instrucciones de preparación y esterilizá el medio según los protocolos establecidos.

• En un plato o bol resistente al calor, mezclá 1/2 cucharadita de agar nutritivo en polvo con 60 ml (aproximadamente 1/4 taza) de agua caliente. Multiplicá estas cantidades por la cantidad de placas de Petri que planeas usar.
• Colocá el bol o plato en el microondas y ponelo a hervir durante 1 minuto, vigilándolo para asegurarte de que la solución de agar no hierva en exceso.
• Una vez que la solución esté lista, el polvo de agar debe estar disuelto por completo y el líquido debe ser claro.
• Dejá enfriar la solución de agar durante varios minutos antes de proseguir.
  
  

2. Esterilización de las placas de Petri:

Podes utilizar placas de Petri de vidrio o de plástico. Las placas de Petri son recipientes pequeños de base plana que están hechos de plástico o vidrio transparente. Están constituidas de dos mitades: una tapa y una base, las cuales encajan entre sí. Esto protege el contenido del aire contaminado indeseable, pero también permite que escapen los gases que producen las bacterias.

• Las placas de Petri deben estar bien esterilizadas antes de usarlas para cultivar bacterias; de otro modo, los resultados del experimento podrían verse afectados. Autoclavá las placas para esterilizarlas adecuadamente y evitá tocar la superficie interna con las manos desnudas. Las placas de Petri recién compradas deben venir esterilizadas y selladas en empaques de plástico.
• Sacá la placa de Petri de su paquete y separa las dos mitades. Con mucho cuidado, vertí la solución de agar caliente en la mitad inferior de la placa de Petri, solo lo suficiente para formar una capa por encima del fondo de la placa.
• Volvé a colocar rápido la mitad superior de la placa de Petri para evitar que las bacterias transmitidas por el aire contaminen el experimento. Reservá la placa de Petri durante 30 minutos a 2 horas, hasta que la solución de agar se enfríe y se endurezca (cuando esté lista, se parecerá a gelatina cuajada).
  
  
  

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3. Refrigerá las placas de Petri hasta que estén listas para su uso

Si no planeas usar de inmediato las placas de Petri llenas de agar, debes almacenarlas en el refrigerador hasta que estés listo para continuar con el experimento.

• Guardar las placas de Petri en el refrigerador evita que se evapore el agua al interior de ellas (las bacterias necesitan un ambiente húmedo para crecer). También permite que la superficie del agar se endurezca ligeramente, lo cual evita que la rasgues o le hagas hueco al momento de trasladar tus muestras de bacterias.
• Al momento de guardar las placas de Petri en el refrigerador, debes colocarlas boca abajo. Esto ayudará a evitar que cualquier condensación de agua en la tapa gotee sobre el agar e interrumpa la superficie en crecimiento.
• Las placas de Petri llenas de agar se conservarán el refrigerador hasta un par de meses. Cuando estés listo para usarlas, retiralas del refrigerador y deja que alcancen la temperatura ambiente antes de introducir tus muestras.
  
  
  
  

4. Siembra de bacterias

Con una asa de siembra esterilizada, tomá una pequeña cantidad de la muestra bacteriana que deseas cultivar. Puede ser una muestra pura o una dilución de la misma. Realizá rayas o siembras en la superficie del  medio de cultivo en la placa de Petri. Asegurate de que la siembra sea uniforme y evitar el contacto con los bordes de la placa.  Hay un par de métodos para hacerlo: el contacto directo o la recolección de muestras.

• Contacto directo: es el traslado de las bacterias a la placa de Petri usando el contacto directo, por ejemplo, tocando el agar. Una de las formas más comunes de hacerlo es simplemente presionar ligeramente la yema de tu dedo (ya sea antes o después de lavarte las manos) sobre la superficie del agar. Sin embargo, también podrías tratar de presionar una uña o la superficie de una moneda vieja sobre el agar o incluso colocar un cabello pequeño o una gota de leche en la placa. ¡Echá a andar tu imaginación!
• Recolección de muestras: con este método, podes recolectar bacterias de casi cualquier superficie y trasladarlas a la placa de Petri; lo único que necesitás son algunos hisopos. Simplemente toma un hisopo y pásalo sobre cualquier superficie que se te ocurra (el interior de tu boca, un picaporte, las teclas del teclado de tu computadora o los botones de tu control remoto), luego pásalo por la superficie del agar (sin rasgarla). Estos lugares albergan muchas bacterias y deben proporcionar algunos resultados interesantes (y desagradables) en un par de días.
  
  

5. Etiquetado, Sellado e Incubación

Una vez que hayas sembrado las bacterias, cerrá la tapa de la placa de Petri y colocala en posición invertida para evitar la condensación de agua en el agar. Coloca las placas en una incubadora a la temperatura adecuada para el crecimiento de las bacterias que estás cultivando. La temperatura y el tiempo de incubación variarán según el tipo de bacteria.

• Asegurate de etiquetar cada placa de Petri con el nombre de la fuente de las bacterias que contiene, de otro modo no sabrás cuál es cuál. Podes hacerlo usando un poco de cinta adhesiva y un marcador.
• Como una medida de precaución adicional, podes colocar cada placa de Petri en una bolsa con cierre hermético. Esto proporcionará una capa adicional de protección contra las colonias de bacterias peligrosas que podrían desarrollarse, pero aún te permitirá ver el contenido de la placa de Petri.
  
  

6. Observación y análisis

Pasado el tiempo de incubación, retirá las placas de Petri de la incubadora y examiná las colonias bacterianas que han crecido en el agar. Observá su forma, tamaño, color y cualquier otro rasgo relevante.

• Podes utilizar técnicas de tinción, como la tinción de Gram, para obtener más información sobre las características de las bacterias.
• Usa un cuaderno para registrar tus observaciones respecto al contenido de cada placa y tal vez para llegar a una conclusión sobre qué lugares tenían la mayor cantidad de bacterias.
• Si deseas, podes medir el crecimiento diario de las colonias de bacterias usando un rotulador para trazar un círculo alrededor de cada colonia en la base de la placa de Petri. Después de varios días, debes tener una colección de círculos concéntricos en la base de cada placa.
  
  
  
  

7. Manipulación segura

   Si necesitás transferir o aislar colonias bacterianas individuales, utilizá una asa de siembra esterilizada para hacerlo y evita la contaminación cruzada entre las placas.
   
   

8. Desecho de las bacterias de forma segura

Antes de intentar deshacerte de tus placas de Petri, primero necesitás tomar las medidas de seguridad adecuadas.

• Aunque la mayoría de las bacterias que cultives no serán peligrosas, las colonias de bacterias grandes podrían representar un mayor riesgo, así que debes matarlas antes de desecharlas usando lejía casera.
• Utilizá guantes de goma para protegerte las manos de la lejía, lentes de seguridad de plástico para proteger tus ojos y un mandil para proteger tu ropa.
• Abrí la placa de Petri y vertí con cuidado un poco de lejía por encima de las colonias de bacterias, sosteniendo la placa sobre el fregadero. Esto destruirá las bacterias.
• Tené mucho cuidado de no dejar que la lejía entre en contacto con tu piel, ya que podrías quemarte.
• Luego colocá la placa de Petri desinfectada en una bolsa de plástico con cierre hermético y tira la bolsa a la basura.

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Bonus: Prueba Adicional

Probá la efectividad de los agentes antibacterianos: Una variante interesante de este experimento es introducir un agente antibacteriano (desinfectante de manos, jabón, etc.) en la placa de Petri con el fin de probar su efectividad.

• Una vez que hayas introducido las bacterias en la placa de Petri, usá un hisopo para colocar una gota pequeña de gel desinfectante para manos, jabón desinfectante o lejía casera en el centro de la muestra de bacterias, luego seguí con el experimento como de costumbre.
• A medida que crecen las bacterias en la placa, debes ver un anillo o "halo" alrededor del lugar donde pusiste el agente antibacteriano y donde ninguna bacteria crece. Este se conoce como la "zona de muerte" (o más concretamente, la "zona de inhibición").
• Podes medir la efectividad de distintos agentes antibacterianos comparando el tamaño de las zonas de inhibición en cada placa de Petri. Mientras más ancha sea la zona de inhibición, más efectivo será el agente antibacteriano.

Recordá seguir prácticas de seguridad adecuadas, como el uso de guantes, el manejo adecuado de desechos y la desinfección de áreas de trabajo, para evitar la propagación de bacterias patógenas y proteger tu salud y la de los demás. Es esencial comprender los métodos y técnicas del cultivo microbiano para llevar a cabo este proceso de manera efectiva.

¡Utilizar correctamente las placas de Petri en el cultivo de bacterias en laboratorios te permitirá realizar estudios microbiológicos precisos y obtener resultados confiables!

Fuente: Wikihow - Cómo cultivar bacterias en una placa de Petri