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    One Step-RNA Reagent EZ-RNA (TRIZOL) x 100ml

    PN: BS409A-100ml
    Fabricante: Bio Basic
    Almacenamiento a 2 - 8°C.
    USD 256,64 + IVA
    i h
    Reactivo de ARN de un solo paso

    1. El reactivo de ARN de un solo paso es un reactivo listo para usar para el aislamiento del ARN total de las células y los tejidos. El reactivo, una solución monofásica de fenol e isotiocianato de guanidina, es una mejora del método de aislamiento de ARN de un solo paso desarrollado por Chomczynski y Sacchi. Durante la homogeneización o lisis de la muestra, el reactivo de ARN de UN PASO mantiene la integridad del ARN, al tiempo que altera las células y disuelve los componentes celulares. La adición de cloroformo seguido de centrifugación, separa la solución en una fase acuosa y una fase orgánica. El ARN permanece exclusivamente en la fase acuosa. Después de la transferencia de la fase acuosa, el ARN se recupera por precipitación con alcohol isopropílico. Después de la eliminación de la fase acuosa, el ADN y las proteínas en la muestra se pueden recuperar por precipitación secuencial. La precipitación con etanol produce ADN de la interfase, y una precipitación adicional con alcohol isopropílico produce proteínas de la fase orgánica. La co-purificación del ADN puede ser útil para normalizar los rendimientos de ARN de una muestra a otra.


    2. Esta técnica funciona bien con pequeñas cantidades de tejido (50 ~ 100 mg) y células (5 × 106), y grandes cantidades de tejido (³1 g) y células (> 107), de humanos, animales, plantas o bacterias. origen. La simplicidad del método de reactivo ONE STEP-RNA

    permite el procesamiento simultáneo de una gran cantidad de muestras. Todo el procedimiento se puede completar en una hora. El ARN total aislado mediante el reactivo de ARN de UN PASO está libre de contaminación de proteínas y ADN. Se puede usar para análisis de transferencia Northern, hibridación dot blot, selección de poli (A) +, traducción in vitro, ensayo de protección de RNasa y clonación molecular. Para su uso en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), se recomienda el tratamiento del ARN aislado con DNasa I de grado de amplificación cuando los dos cebadores se encuentran dentro de un solo exón.

    3. El reactivo de ARN de UN PASO facilita el aislamiento de una variedad de especies de ARN de tamaño molecular grande o pequeño. Por ejemplo, el ARN aislado del hígado de rata, sometido a electroforesis en un gel de agarosa y teñido con bromuro de etidio, muestra bandas discretas de ARN de alto peso molecular entre 7 kb y 15 kb de tamaño (compuesto por ARNm y ARNhn) dos bandas de ARN ribosómico predominantes a ~ 5 kb (28S) y a ~ 2 kb (18S), y ARN de bajo peso molecular entre 0.1 y 0.3 kb (tRNA, 5S). El ARN aislado tiene una relación A260 / 280 de 1.6 ~ 1.8 cuando se diluye en agua destilada. El rendimiento esperado de ARN por mg de tejido es: hígado y bazo, 6 ~ 10 mg; riñón, 3 ~ 4 mg; músculos esqueléticos y cerebro, 1 ~ 5 mg; placenta, 1 ~ 4mg. El rendimiento esperado de ARN de 1 × 10 6 células cultivadas es: células epiteliales, 8 ~ 15 mg; fibroblastos, 5 ~ 7 × mg.