El cultivo de células es una herramienta fundamental dentro de las ciencias de la vida, y desempeña un papel fundamental para responder preguntas científicas básicas y de investigación de traducción en todas las disciplinas. Mantener cultivos saludables es vital para obtener datos confiables y de alta calidad.
El cultivo de células es un trabajo técnico y exigente. Debido a que es un proceso altamente técnico, hay muchas cosas que pueden salir mal cuando tomas células de una fuente y las manipulas en otra, desde la contaminación hasta el crecimiento mediocre.
Pero también hay muchas cosas que pueden salir bien. En los últimos más de 100 años, los experimentos de cultivo de células adherentes han contribuido a algunos de los avances más revolucionarios de la medicina moderna. Estos han mejorado nuestra comprensión de enfermedades como el cáncer y apoyado el desarrollo de tratamientos seguros y efectivos.
Afortunadamente, ahora se sabe mucho más sobre el cultivo que cuando el pionero in vitro, Ross Harrison, analizó tejido de rana en un portaobjetos de vidrio a principios del siglo XX.
En esta guía, compartimos los conceptos básicos aprendidos durante más de un siglo de jugar con células vivas, incluido cómo sembrar, expandir y cosechar cultivos celulares.
- El cultivo celular es esencial en ciencias de la vida y requiere rigurosos cuidados para asegurar resultados confiables.
- El proceso comienza con la siembra desde un estado criogénico, donde la manipulación estéril es clave para evitar contaminación.
- Una correcta expansión celular asegura eficiencia, uniformidad y ahorro en insumos y tiempo de trabajo.
- La elección del recipiente y la proporción células/cm² y medio/cm² son fundamentales para un crecimiento óptimo.
- Las células adherentes se recolectan mediante métodos químicos o físicos, según su sensibilidad y la aplicación futura.
- Dominar estos procesos permite avanzar hacia protocolos más complejos y aplicaciones científicas innovadoras.
Siembra celular desde un estado criogénico
En la compra de líneas de cultivo celular, los productos vienen criopreservados, lo cual es necesario para mantener la viabilidad celular a largo plazo. A partir de ese estado, deberá descongelar y sembrar las células. Este paso no debe apresurarse, aunque suceda rápido. Sin embargo, a menudo se apresura y, a veces, se pasa por alto, lo que corre el riesgo de contaminación y no le da a las células el buen comienzo estéril que necesitan.
Esta es la forma correcta de realizar el proceso de siembra de células:
- Prepara todos tus suministros. Necesitarás el vial crioconservado, un vaso de precipitados o un baño de agua lleno de agua precalentada y un matraz con medios preequilibrados.
- Caliente el vial. Agitar suavemente el vial crioconservado en el vaso de agua precalentada hasta que el contenido se descongele casi por completo. Luego, limpiar con alcohol.
- Siembra tus células. Con una pipeta, transfiérelas al matraz y mezclar para facilitar la siembra. Luego, directo a la incubadora o centrífuga.
Ampliación con expansión celular
La expansión celular es una parte necesaria del cultivo celular que se basa tanto en la eficiencia como en la consistencia. Si sigues un flujo de trabajo ineficiente, probablemente aumentarás los costos de suministros y mano de obra. Si sigues un flujo de trabajo inconsistente, podrías sobrecargar tus células y matarlas.
Lograr el equilibrio adecuado dependerá de la elección del recipiente. Las opciones multicapa, como los Corning, pueden ayudar a los científicos de la vida a establecer condiciones amigables para un crecimiento más rápido en un espacio más pequeño, y también con menos mano de obra y riesgo de contaminación.
Debido a que no todos los recipientes tienen la misma área de crecimiento, los investigadores generalmente pensarán en términos de rendimiento de células/cm2 para determinar qué recipiente usar. Para un crecimiento óptimo, mantenga proporciones adecuadas siguiendo estas fórmulas:
- [(células/cm2 deseadas)*(cm2 del vaso)]
- [(mls/cm2 deseados)*(cm2 del recipiente)] — típicamente entre 0,2 ml y 0,5 ml de medio por cm2.
Recolección de las células adherentes
Sabrás que las células están listas para cosechar cuando aparezcan como una monocapa en todo el cultivo bajo el microscopio. En ese momento, los científicos generalmente eliminarán las células por medios químicos o físicos.
La eliminación química con reactivos de disociación debe adaptarse a la célula y su aplicación. La eliminación física con raspadores puede ser mejor para células sensibles. Considere cómo puede afectar esto a estudios posteriores.
Si elige usar reactivos de disociación, siga este proceso con una pipeta:
- Retire el medio del matraz.
- Agregue solución tampón (PBS) para eliminar suero. Mueva suavemente, remoje y retire.
- Agregue reactivo de disociación (0,02–0,03 mL/cm2). Puede incubar a 37°C.
- Cuando las células estén redondeadas, diluya el reactivo con suero o tampón, pipetee y transfiéralas.
- Concluya con centrifugación si es necesario. Las células están listas para contarse y evaluarse.
Preguntas frecuentes
¿Qué es la siembra celular desde un estado criogénico?
Es el proceso mediante el cual se descongelan células criopreservadas y se transfieren a un matraz con medios adecuados para su crecimiento, cuidando la esterilidad y evitando choques térmicos.
¿Cómo se realiza la expansión celular de forma eficiente?
Calculando correctamente la densidad celular y el volumen de medio por área de cultivo, eligiendo recipientes adecuados y manteniendo proporciones consistentes en cada etapa del proceso.
¿Cuándo y cómo se recolectan las células adherentes?
Cuando las células forman una monocapa uniforme, se recolectan mediante reactivos de disociación o raspadores, eligiendo el método según su sensibilidad y los requerimientos del estudio posterior.
Cómo hacer que el cultivo celular funcione para vos
Los cultivos de células adherentes pueden abrir tu laboratorio a un mundo completamente nuevo de experimentación. Pero hay mucho en juego cuando se manipulan células vivas, por lo que es importante hacerlo correctamente.
Si sigues estos consejos esenciales y progresas hacia protocolos más avanzados, podés convertirte en un profesional del cultivo celular rápidamente. Familiarizarse con el manejo adecuado de la placa de Petri es clave para garantizar el éxito y la salud de tus cultivos.
Fuente: Corning. Guide to Adherent Cell Culture Basics: Seeding, Expanding, and Harvesting
