El procedimiento de purificación por PCR MinElute elimina cebadores, nucleótidos, enzimas, aceite mineral, sales y otras impurezas de las muestras de ADN.
El MinElute PCR Purification Kit proporciona columnas giratorias para la limpieza de productos de PCR. Usando una microcentrífuga o un colector de vacío, se logra rápidamente una alta concentración de fragmentos de ADN (70 pb - 4 kb). (Los fragmentos de ADN de más de 4 kb deben purificarse con el kit de purificación QIAquick PCR).Principio
El MinElute PCR Purification Kit contiene un ensamblaje de membrana de sílice para la unión del ADN en un tampón con alto contenido de sal y la elución con un tampón con bajo contenido de sal o agua. La tecnología de membrana de sílice elimina los problemas e inconvenientes asociados con las resinas sueltas y lodos.
Para permitir un procesamiento y análisis de muestras más rápido y conveniente, se proporciona un tinte de carga de gel. GelPilot Loading Dye contiene tres colorantes de rastreo (cianol de xileno, azul de bromofenol y naranja G) para facilitar la optimización del tiempo de ejecución del gel de agarosa y evitar que los fragmentos de ADN más pequeños migren demasiado
Procedimiento
El sistema MinElute utiliza un procedimiento simple de unión, lavado y elución. El tampón de unión se agrega directamente a la muestra de PCR u otra reacción enzimática, y la mezcla se aplica a la columna de centrifugación MinElute. El tampón de unión contiene un indicador de pH, lo que permite determinar fácilmente el pH óptimo para la unión del ADN . Los ácidos nucleicos se adsorben en la membrana de sílice en las condiciones de alto contenido de sal proporcionadas por el tampón. Las impurezas se eliminan por lavado y el ADN puro se eluye con un pequeño volumen de tampón bajo en sal proporcionado o agua, listo para usar en aplicaciones posteriores.
Aplicaciones
Los fragmentos de ADN purificados con el sistema MinElute están listos para su uso directo en todas las aplicaciones, incluidas:
- Secuenciación, incluida la secuenciación de próxima generación
- Análisis de micromatrices
- Ligadura y transformación
- Digestión de restricción
- Etiquetado