Resina Ni-NTA Agarosa x 25ml, resina cargada de niquel para purificar proteinas 6X His-tagged

PN: 30210

Fabricante: Qiagen

Ni-NTA Agarosa es una matriz de cromatografía de afinidad para purificar proteínas recombinantes que llevan una etiqueta His. Los residuos de histidina en la etiqueta His se unen a las posiciones vacantes en la esfera de coordinación de los iones de níquel inmovilizados con alta especificidad y afinidad. Los lisados de células limpias se cargan en las matrices. Las proteínas etiquetadas con His se unen y otras proteínas pasan a través de la matriz. Después del lavado, las proteínas etiquetadas con His se eluyen en tampón en condiciones nativas o desnaturalizantes.

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$ 122.905,10 + IVA (21%)

Cant:

i h

Rendimiento

Ni-NTA Agarosa proporciona Ni-NTA acoplado a un soporte de Sepharose CL-6B y ofrece una alta capacidad de unión y una mínima unión no específica. Este material tiene excelentes propiedades de manejo para la mayoría de las escalas de purificación por lotes y columnas. La agarosa Ni-NTA está disponible por separado o como componente de los kits QIA express , que son kits completos para la expresión y purificación eficientes de proteínas marcadas con His de E. coli .

Principio

El sistema de purificación de proteínas QIA express Ni-NTA se basa en la notable selectividad de la resina patentada de Ni-NTA (ácido nitrilotriacético de níquel) para proteínas que contienen una etiqueta de afinidad de seis o más residuos de histidina (consecutivos o alternos): la etiqueta His. Esta tecnología permite la purificación en un solo paso de casi cualquier proteína etiquetada con His de cualquier sistema de expresión en condiciones nativas o desnaturalizantes. NTA, que tiene cuatro sitios de quelación para los iones de níquel, une el níquel con más fuerza que los sistemas de purificación de quelación de metales que solo tienen tres sitios disponibles para la interacción con los iones metálicos. El sitio de quelación adicional evita la lixiviación de iones de níquel y da como resultado una mayor capacidad de unión y preparaciones de proteínas con mayor pureza que las obtenidas utilizando otros sistemas de purificación de quelación de metales. El QIAEl sistema express se puede utilizar para purificar proteínas marcadas con His de cualquier sistema de expresión, incluidos baculovirus, células de mamíferos, levaduras y bacterias.

Procedimiento

La purificación de proteínas marcadas con His consta de 4 etapas: lisis celular, unión, lavado y elución. La purificación de proteínas recombinantes mediante el sistema QIA express no depende de la estructura tridimensional de la proteína ni de la etiqueta 6xHis. Esto permite la purificación de proteínas en un solo paso en condiciones nativas o desnaturalizantes, a partir de soluciones diluidas y lisados crudos. Se pueden usar desnaturalizantes y detergentes fuertes para la solubilización y purificación eficientes de receptores, proteínas de membrana y proteínas que forman cuerpos de inclusión. Los reactivos que permiten la eliminación eficiente de los contaminantes que se unen de forma no específica se pueden incluir en los tampones de lavado (consulte la tabla). Las proteínas purificadas se eluyen en condiciones suaves mediante la adición de imidazol 100-250 mM como competidor o mediante una reducción del pH.