Después de la inmunización con digoxigenina, se purificó la IgG de oveja mediante cromatografía de intercambio iónico, y la IgG específica se aisló mediante inmunoadsorción. Los fragmentos Fab obtenidos mediante digestión con papaína se unificaron por filtración en gel, se conjugaron con el marcaje específico y se estabilizaron en disolución tampón.
Concentración de trabajo: La concentración de trabajo del conjugado dependerá de la aplicación y del sustrato. Las siguientes concentraciones deben tomarse como pauta:
- Inmunotransferencia por puntos (dot blot): 150 mU/ml
- ELISA: de 150 a 300 mU/ml
- Inmunohistocitoquímica: de 250 a 500 mU/ml
- Hibridación in situ: de 1,5 a 7,5 U/ml
- Inmunotransferencia Southern: 150 mU/ml
- Inmunotransferencia Western: de 250 a 500 mU/ml
Disolución de trabajo: Inmunotransferencia Northern, inmunotransferencia Southern
Ácido maleico 100 mM, NaCl 150 mM, pH 7,5.
Inmunotransferencia Western
Tris-HCl 50 mM, NaCl 150 mM, pH 7,5
otras aplicaciones
Tris-HCl 100 mM, NaCl 150 mM, pH 7,5
Para reducir la unión inespecífica pueden utilizarse reactivo bloqueante al 1% (p/v), suero fetal bovino inactivado por calor al 1-5% (v/v) o suero normal de oveja .
Condiciones de almacenamiento (disolución de trabajo): El conjugado diluido es estable entre 2 y 8 °C durante 12 horas.
Preparar siempre fresco.