FastStart SYBR Green Master x 500 reacciones

FastStart^™ SYBR^® Green Master es una mezcla de reacción de inicio en caliente lista para ser utilizada sin ROX para la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) en sistemas de PCR en tiempo real con transcriptasa inversa (RT)-qPCR distintos de los equipos LightCycler^®. Esta mezcla maestra simplifica la preparación de las reacciones para la detección y el análisis del ADN. En combinación con un equipo de PCR en tiempo real, los cebadores de PCR adecuados y una sonda de hidrólisis, FastStart^™ TaqMan^® Probe Master permite la detección y la cuantificación muy sensibles de secuencias de ADN definidas.
El SYBR^® Green I es un colorante específico para el ADN bicatenario. Durante cada fase de síntesis de ADN, el colorante SYBR^® Green I, que está incluido en la mezcla de reacción, se une a los productos amplificados de la PCR. El amplicón puede detectarse por su fluorescencia.
Se ha demostrado que los protocolos de inicio en caliente mejoran de manera significativa la especificidad, la sensibilidad y el rendimiento de la PCR. Grupos de bloqueo termolábiles en algunos de los restos de aminoácido de la ADN polimerasa Taq FastStart^™ inactivan la enzima modificada a temperatura ambiente. Por consiguiente, no hay elongación durante el periodo en el que los cebadores pueden unirse de manera inespecífica. La ADN polimerasa Taq FastStart^™ se activa eliminando los grupos bloqueantes a una temperatura elevada (es decir, una etapa previa a la incubación a +95°C).
El FastStart^™ SYBR^® Green Master puede utilizarse para la amplificación y la detección de cualquier ADN o ADNc específicos, incluso los que son ricos en GC o AT. Sin embargo, habría que adaptar el protocolo de detección a las condiciones de reacción del equipo de PCR en tiempo real concreto utilizado y diseñar cebadores PCR específicos para cada diana.
Combine esta mezcla maestra con nuestro kit Transcriptor para la síntesis de la cadena primaria del ADNc para conseguir resultados excelentes en la qRT-PCR en dos etapas.

La mezcla maestra FastStart^™ SYBR^® Green Master se ha utilizado en la qPCR y la qRT-PCR en el formato de detección SYBR^® Green I. También se utiliza:

• en la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) para cuantificación de la concentración de virus adenoasociados (AAV)[1]
• en qPCR para determinar el nivel de expresión de diferentes genes Col6a1-3 relativos a la gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH)[2]
• en la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real cuantitativa (qRT-PCR) del ARNm del receptor-1 de estrógenos acoplado a la proteína G (GPER)[3]
• en la qRT-PCR para estudios de expresión génica[4]

Utilice la mezcla FastStart^™ SYBR^® Green Master con cualquier equipo de PCR en tiempo real que no sea un LightCycler^®.

• Mayor sensibilidad y especificidad de la PCR.

Confíe en la ADN polimerasa Taq FastStart de la mezcla para minimizar la formación de productos de amplificación inespecíficos a través de la PCR de inicio en caliente.

• Evita la sobrevaloración de los resultados de la qPCR:

Elimina los productos inespecíficos de la amplificación y los dímeros de cebador que aumentarían la cantidad de SYBR Green I ligado cuantificado.

• Amplifica y detecta una amplia variedad de ADN y ADNc específicos.

Amplifica fragmentos de hasta 500 pb de longitud, entre ellos los fragmentos ricos en GC y AT. Funciona con cualquier equipo de PCR en tiempo real que no sea un equipo LightCycler^®.

• Utilice cualquier equipo de PCR en tiempo real que no sea un equipo LightCycler^®:

Elija entre dos formulaciones, una que contiene el colorante de referencia ROX y otra que no lo contiene.

• Ahorre tiempo y esfuerzo en la preparación de la qPCR:

Confíe en esta mezcla maestra 2x ya preparada para eliminar la necesidad de mezclar los componentes, valorar el MgCl2 o realizar otras largas etapas de optimización.

• Evite los resultados falsos positivos que aparecen como consecuencia de la contaminación por arrastre:

La mezcla contiene dUTP, de modo que puede utilizarse con la uracil-ADN glucosilasa para eliminar el ADN contaminante arrastrado de las reacciones de PCR anteriores.

Prueba de la función: Se analiza el rendimiento de cada lote en la qPCR utilizando tres moldes: uno rico en GC, uno rico en AT y un molde largo (de unas 440 pb).

qPCR específicas
En principio, el FastStart SYBR Green Master puede utilizarse para la amplificación y la detección de cualquier ADN o ADNc específico, incluso los ricos en GC o AT. Sin embargo, para cada diana, se necesitará:

• adaptar el protocolo de detección a las condiciones de reacción del equipo de PCR en tiempo real, así como
• diseñar los cebadores de PCR específicos para la diana.