Establecer un protocolo detallado para evaluar la diversidad funcional de comunidades microbianas en muestras ambientales de suelo y agua mediante el uso de microplacas EcoPlate™ de Biolog™. Además de evaluar la diversidad funcional de las comunidades microbianas, el uso de EcoPlate™ permite complementar el análisis con pruebas bioquímicas e identificación de microorganismos, facilitando una caracterización más completa de las muestras ambientales.
El análisis microbiológico de muestras ambientales no solo requiere técnicas precisas, sino también un enfoque adecuado para el cultivo microbiano, permitiendo el desarrollo y estudio de los microorganismos presentes en cada muestra.
- El uso de EcoPlate™ permite evaluar la funcionalidad de comunidades microbianas en suelo y agua.
- La metodología requiere la recolección de muestras en condiciones estériles y su rápida procesamiento.
- El ajuste adecuado de la densidad celular garantiza resultados más precisos en el análisis de biodegradación de sustratos.
- Los datos obtenidos pueden analizarse con herramientas estadísticas multivariadas para detectar patrones microbianos.
- OneLab ofrece EcoPlate™ y otros insumos clave para el análisis microbiológico de muestras ambientales.
Materiales y Equipos Necesarios
- Microplacas EcoPlate™ de Biolog™
- Turbidímetro Biolog (opcional, puede utilizarse un espectrofotómetro)
- Lector de microplacas o sistema IDStation™
- Pipetas multicanal y puntas estériles
- Tubos de ensayo para preparar las suspensiones de células
- Fluido de inoculación Biolog GN/GP (según el tipo de muestra)
- Agua estéril
- Reactivos para la preparación de la muestra (p. ej., solución tampón fosfato)
Recolección y Preparación de la Muestra
Paso 1: Recolección de la Muestra
- Recoger las muestras de suelo o agua en condiciones estériles.
- Mantener las muestras refrigeradas a 4 °C y procesarlas lo antes posible.
Paso 2: Preparación de la Suspensión Microbiana
- Para muestras de suelo: Pesar 10 g de suelo y mezclarlos en 100 mL de agua estéril en un matraz Erlenmeyer. Agitar durante 30-60 minutos.
- Para muestras de agua: Tomar 10-50 mL y centrifugar si es necesario (4,000 rpm, 10 min) para concentrar los microorganismos.
Inoculación de las Microplacas EcoPlate™
- Distribuir 100 µL de la suspensión microbiana en cada pocillo de la microplaca.
- Cubrir las placas y sellarlas para evitar evaporación y contaminación cruzada.
Incubación
- Incubar las placas a 25-30 °C en una incubadora con humedad controlada.
- Duración recomendada: 24 a 72 horas, dependiendo del análisis.
Lectura y Análisis de Datos
- Medir la absorbancia en 592 nm (viraje colorante) y 750 nm (turbidez).
- Realizar lecturas iniciales y periódicas para evaluar la cinética de coloración.
Interpretación de Resultados
- Un cambio de color a púrpura indica la utilización del sustrato por los microorganismos.
- Calcular el Promedio de Desarrollo de Color (AWCD) para analizar patrones de utilización.
Preguntas frecuentes
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Conclusiones sobre el Protocolo de Trabajo para el Uso de EcoPlates a partir de Muestras de Suelo y Agua
El uso de EcoPlate™ es una herramienta poderosa para evaluar la diversidad funcional de comunidades microbianas en muestras ambientales. La correcta aplicación del protocolo permite obtener resultados confiables y reproducibles.
En OneLab, ofrecemos insumos esenciales para análisis microbiológicos con la más alta precisión.
Fuente: OneLab, Material desarrollado por Celeste Marin, nuestra líder científica.
